კოხის მეთოდის გამოყენების პრაქტიკული მნიშვნელობა. კოხის ჭიქის მეთოდი. ტუბერკულოზის გამომწვევი მიზეზის დადგენა
პასტერის მეთოდი (განზავების შეზღუდვის მეთოდი).იგი შედგება შესწავლილი მასალისგან თხევად საკვებ გარემოში თანმიმდევრული განზავების სერიისგან. ამისათვის ინოკულუმის წვეთი შეჰყავთ სინჯარაში სტერილური თხევადი საშუალებით, მისგან წვეთი გადადის შემდეგ სინჯარაში და ამ გზით ხდება 8...10-მდე სინჯარის ინოკულაცია. ყოველი განზავებისას მიკრობული უჯრედების რაოდენობა შემცირდება გარემოში და შესაძლებელია მივიღოთ ისეთი განზავები, რომლითაც მთელ სინჯარაში იქნება მხოლოდ ერთი მიკრობული უჯრედი, საიდანაც მოხდება მიკროორგანიზმის სუფთა კულტურა. განავითაროს. ვინაიდან მიკრობები დიფუზურად იზრდებიან თხევად გარემოში, ე.ი. ადვილად ნაწილდება მთელს გარემოში, ძნელია ერთი მიკრობული უჯრედის მეორისგან იზოლირება. ამრიგად, პასტერის მეთოდი ყოველთვის არ იძლევა სუფთა კულტურას. ამიტომ, ამჟამად, ეს მეთოდი ძირითადად გამოიყენება მასალაში მიკროორგანიზმების კონცენტრაციის წინასწარი შემცირების მიზნით, სანამ იგი ჩანერგილი იქნება მყარ გარემოში იზოლირებული კოლონიების მისაღებად.
მიკროორგანიზმების მექანიკური გამოყოფის მეთოდები მყარი საკვები ნივთიერებების გამოყენებით.ასეთ მეთოდებს მიეკუთვნება კოხის მეთოდი და დრიგალსკის მეთოდი.
კოხის მეთოდი (ღრმა თესვის მეთოდი).ტესტის მასალა შეჰყავთ ბაქტერიოლოგიური მარყუჟით ან პასტერის პიპეტით საცდელ მილში გამდნარი მკვრივი მკვებავი გარემოთი. ცდის მილის შიგთავსი თანაბრად აურიეთ ხელისგულებს შორის მობრუნებით. განზავებული მასალის წვეთი გადადის მეორე სინჯარაში, მეორედან მესამეში და ა.შ. თითოეული სინჯარის შიგთავსი, პირველიდან დაწყებული, ასხამენ სტერილურ პეტრის ჭურჭელში. მას შემდეგ, რაც საშუალო გამაგრდება ჭურჭელში, ისინი მოთავსებულია თერმოსტატში გასაშენებლად.
კოხის მეთოდით ანაერობული მიკროორგანიზმების იზოლირებისთვის აუცილებელია კულტურაში ჟანგბადის წვდომის შეზღუდვა. ამ მიზნით პეტრის ჭურჭელში ღრმა დათესვის ზედაპირი ივსება პარაფინისა და ნავთობის ჟელეს სტერილური ნარევით (1:1). თქვენ ასევე შეგიძლიათ დატოვოთ ინოკულუმი, კარგად შერეული აგარის გარემოში, პირდაპირ სინჯარაში. ამ შემთხვევაში ბამბის საცობი იცვლება რეზინით ან აგარის ზედაპირი ივსება პარაფინისა და ნავთობის ჟელეს ნარევით. ანაერობული მიკროორგანიზმების გაზრდილი კოლონიების ამოსაღებად, მილები ოდნავ თბება სანთურის ცეცხლზე სწრაფად ბრუნვით. კედლების მიმდებარე აგარი დნება და სვეტი ადვილად სრიალებს მომზადებულ პეტრის ჭურჭელში. შემდეგ, აგარის სვეტი იჭრება სტერილური სკალპელით, კოლონიები ამოღებულია სტერილური მარყუჟით ან სტერილური კაპილარული საჭრელით და გადადის თხევად გარემოში.
დრიგალსკის მეთოდიეფუძნება მიკრობული უჯრედების მექანიკურ გამოყოფას პეტრის ჭურჭელში მკვრივი საკვები გარემოს ზედაპირზე. თითოეული მიკრობული უჯრედი, რომელიც თავის თავს აფიქსირებს გარკვეულ ადგილას, იწყებს გამრავლებას და ქმნის კოლონიას.
დრიგალსკის მეთოდით თესვისთვის გამოიყენება მკვრივი საკვები გარემოთი სავსე პეტრის რამდენიმე ჭურჭელი. საცდელი მასალის წვეთი მოთავსებულია საშუალების ზედაპირზე. შემდეგ, სტერილური სპატულის გამოყენებით, ეს წვეთი ნაწილდება მთელ მკვებავ გარემოში (გაზონის დათესვა).
თესვა შეიძლება მოხდეს ბაქტერიოლოგიური მარყუჟის გამოყენებით ზოლებითაც. იგივე სპატული ან მარყუჟი გამოიყენება მეორე, მესამე და ა.შ. ჭიქები. როგორც წესი, თესლის კულტივაციის შემდეგ პირველ ჭიქაში მიკრობული ზრდა ჩნდება უწყვეტი საფარის სახით, შემდეგ ჭიქებში მცირდება მიკროორგანიზმების შემცველობა და წარმოიქმნება იზოლირებული კოლონიები, საიდანაც სკრინინგით ადვილად შეიძლება გამოიყოს სუფთა კულტურა. .
ამრიგად, პირველ სექტორებში მიიღება უწყვეტი ზრდა და შემდგომი ინსულტის დროს გაიზრდება იზოლირებული კოლონიები, რომლებიც წარმოადგენენ ერთი უჯრედის შთამომავლობას.
მედიისა და ჭურჭლის დაზოგვის მიზნით, შეგიძლიათ გამოიყენოთ ერთი ჭიქა, დაყოთ ის სექტორებად და თანმიმდევრულად დათესოთ ისინი ზოლით (დამშლელი ზოლის მეთოდი). ამისათვის აიღეთ მასალა მარყუჟში და დახაზეთ მასთან პარალელური შტრიხების სერია, ჯერ პირველი სექტორის ზედაპირის გასწვრივ, შემდეგ კი თანმიმდევრულად დათესეთ ყველა სხვა სექტორი მარყუჟზე დარჩენილი უჯრედებით. ყოველი მომდევნო ინსულტის დროს დათესილი უჯრედების რაოდენობა მცირდება.
ქიმიკატების გამოყენებით სუფთა კულტურების იზოლირების მეთოდიგამოიყენება გარკვეული ქიმიკატების მიმართ რეზისტენტული მიკროორგანიზმების კულტურების იზოლირებისთვის. მაგალითად, ამ მეთოდის გამოყენებით შესაძლებელია ტუბერკულოზური მიკობაქტერიების სუფთა კულტურის იზოლირება, რომლებიც მდგრადია მჟავების, ტუტეებისა და ალკოჰოლის მიმართ. ამ შემთხვევაში შესასწავლ მასალას თესვის წინ ავსებენ 15%-იანი მჟავას ხსნარით ან ანტიფორმინით და აჩერებენ თერმოსტატში 3...4 საათის განმავლობაში. მჟავას ან ტუტეზე ზემოქმედების შემდეგ ტუბერკულოზის ბაცილის უჯრედები ცოცხალი რჩება და ყველა სხვა მიკროორგანიზმი, რომელიც შეიცავს საკვლევ მასალას, კვდება. მჟავას ან ტუტეს განეიტრალების შემდეგ დამუშავებული მასალა ითესება მყარ გარემოზე და მიიღება ტუბერკულოზის გამომწვევის იზოლირებული კოლონიები.
22. აერობების სუფთა კულტურების გამოყოფის მეთოდები.
სუფთა კულტურის იზოლირების პროცესი შეიძლება დაიყოს რამდენიმე ეტაპად.
პირველი ეტაპი. შესამოწმებელი მასალისგან ამზადებენ ნაცხს, ღებავენ გრამით ან სხვა მეთოდით და მიკროსკოპულად კოპირდებიან. ინოკულაციისთვის, საცდელი მასალა, საჭიროების შემთხვევაში, განზავებულია სინჯარაში სტერილური იზოტონური ნატრიუმის ქლორიდის ხსნარით. მომზადებული განზავების ერთი წვეთი მარყუჟის სახით წაისვით მკვებავი აგარის ზედაპირზე პეტრის ჭურჭელში და საფუძვლიანად შეიზილეთ მასში სპატულით, თანაბრად გადაანაწილეთ მასალა მთელ ზედაპირზე. დათესვის შემდეგ ფინჯანს აბრუნებენ, აკრავენ ეტიკეტს და ათავსებენ თერმოსტატში 37 °C ტემპერატურაზე 18-24 საათის განმავლობაში.
მეორე ფაზა. ისინი ათვალიერებენ კერძებს და სწავლობენ იზოლირებულ კოლონიებს, ყურადღებას აქცევენ მათ ფორმას, ზომას, თანმიმდევრულობას და სხვა მახასიათებლებს. უჯრედების მორფოლოგიის და მათი ტინქტური თვისებების დასადგენად, ნაცხი მზადდება შესასწავლი კოლონიის ნაწილიდან, შეღებილია გრამით და მიკროსკოპით. სუფთა კულტურის იზოლირებისა და დაგროვების მიზნით, ერთი იზოლირებული კოლონია ან რამდენიმე სხვადასხვა იზოლირებული კოლონიაა სუბკულტურული ცალკეულ მილებში დახრილი აგარით ან სხვა საკვები ნივთიერებებით. ამისათვის კოლონიის ნაწილი ამოღებულია მარყუჟით, მეზობელ კოლონიებთან შეხების გარეშე.
მესამე ეტაპი: აღინიშნება იზოლირებული სუფთა კულტურის ზრდის ნიმუში. ვიზუალურად სუფთა კულტურა ხასიათდება ერთგვაროვანი ზრდით. ასეთი კულტურისგან მომზადებული შეღებილი ნაცხის მიკროსკოპული გამოკვლევა ავლენს მორფოლოგიურად და ტინქტურად ერთგვაროვან უჯრედებს. თუმცა, ზოგიერთი ტიპის ბაქტერიისთვის დამახასიათებელი გამოხატული პოლიმორფიზმის შემთხვევაში, სუფთა კულტურის ნაცხებში, ტიპიურთან ერთად, გვხვდება უჯრედის სხვა ფორმებიც.
23. ანაერობების სუფთა კულტურების გამოყოფის მეთოდები.
ანაერობების საკვები ნივთიერებები უნდა აკმაყოფილებდეს შემდეგ ძირითად მოთხოვნებს: 1) აკმაყოფილებდეს კვების საჭიროებებს; 2) მიკროორგანიზმების სწრაფი ზრდის უზრუნველყოფა; 3) ადეკვატურად შემცირდეს
ინოკულაციები ანაერობული მიკროფლორის იზოლირების მიზნით, როგორც სპორის წარმომქმნელი (კლოსტრიდიები), ისე არასპორის წარმომქმნელი (ვეილონელა, ბაქტერიოიდები, პეპტოკოკები), ტარდება მკაცრად ანაერობულ პირობებში. პირველადი ინოკულაციები კეთდება გამდიდრებელ გარემოზე (თიოგლიკოლატი, კიტა - ტაროცი), შემდეგ სუბკულტივირებულია მყარ გარემოზე: შაქრის სისხლის აგარი პეტრის კერძებში, შაქრის მკვებავი აგარის მაღალ სვეტში ან სხვა გარემოში იზოლირებული კოლონიების მისაღებად. ნათესების ინკუბაციის შემდეგ ანაერობულ პირობებში, ნაცხი მზადდება მიღებული ბაქტერიული კოლონიებიდან, შეღებილი, მიკროსკოპული და შემდეგ სუბკულტურა Kitt-Tarozzi-სა და აგარის გარემოზე სუფთა კულტურის იზოლირებისთვის.
სპორის წარმომქმნელი ანაერობული ბაქტერიების (კლოსტრიდიების) იზოლირებისას, საწყისი ინოკულაციები თბება წყლის აბანოში 80 °C ტემპერატურაზე 20 წუთის განმავლობაში, რათა გაანადგურონ უცხო მიკროფლორის მცენარეული უჯრედები, რომლებიც შესაძლოა იმყოფებოდეს საცდელ მასალაში.
24. მიკროორგანიზმების იდენტიფიკაცია მორფოლოგიური, კულტურული სეროლოგიური, ბიოლოგიური, გენეტიკური.
იდენტიფიკაცია არის სისტემატური პოზიციის განსაზღვრა, გამოყოფა ნებისმიერი წყაროდან სახეობის ან ვარიანტის დონეზე.
25. ბიოქიმიური იდენტიფიკაციის მეთოდი: პროტეოლიზის განსაზღვრა. საქაროლიზური, ლიპოლიტიკური თვისებები, ჰემოლიზინისა და ოქსიდორედუქტაზების იდენტიფიკაცია. ავტომატური მიკრობიოლოგიური ანალიზატორების გამოყენება .
ეს მეთოდი გულისხმობს სხვადასხვა სუბსტრატების (ნახშირწყლები, ამინომჟავები და ცილები, შარდოვანა, წყალბადის ზეჟანგი და სხვ.) ფერმენტული დეგრადაციის შესწავლას შუალედური და საბოლოო წარმოქმნით.
პროდუქტები.
ნახშირწყლები- ფერმენტები, რომლებიც ანადგურებენ ნახშირწყლებს. ნახშირწყლების განსაზღვრით ე.წ მიკრობების საქაროლიზური თვისებები. ამ მიზნით გამოიყენება შემდეგი მედია:
ა) ჰისის მედია (თხევადი და ნახევრად თხევადი ინდიკატორებით). ამ უკანასკნელად გამოიყენება ანდრედეს რეაგენტი, ბრომოთიმოლ ლურჯი ან BP.ბაქტერიების ფერმენტული აქტივობა ფასდება გარემოს ფერის ცვლილებით და გაზის წარმოქმნით;
ბ) დიფერენციალური დიაგნოსტიკური საშუალებები ლაქტოზასთან (ენდო, ლევინა, პლოსკირევა და სხვ.);
გ) პოლიკარბოჰიდრატული მედიის (როგორიცაა ოლკენიცკი, კლიგლერი და სხვ.).
პროტეაზები- ფერმენტები, რომლებიც ანადგურებენ ცილებს:
ა) შესასწავლ კულტურას შეუძლია დაშალოს სუბსტრატის ცილები პეპტონის, ალბუმინისა და ამინომჟავების წარმოქმნით. ეს პროცესი ხდება ფერმენტების პროტეინაზების და პეპტიდაზების გამო. ამ ფერმენტების იდენტიფიცირებისთვის, შესასწავლი კულტურა ჩაითვლება მთელ რიგ მედიაზე: შედედებული შრატი, ჟელატინის სვეტი (დადებით შემთხვევებში გათხევადება), რძის აგარი პეტრის ჭურჭელში (დადებით შემთხვევებში კოლონიების ირგვლივ ჩნდება სიმღვრივის ზონები). ;
ბ) ამინომჟავების დაშლა მიკრობების მიერ შეიძლება მოხდეს დეკარბოქსილირების ან დეამინაციის გზით. პირველ შემთხვევაში, ამა თუ იმ ამინომჟავისგან წარმოიქმნება ამინები, რომლებიც გამოვლენილია ან ელექტროფორეზით. ან საშუალების ალკალიზაციის გზით. მიკრობში დეამინაზების არსებობა ფასდება გარემოში ამიაკის წარმოქმნით ამინომჟავების დეამინირების პროცესის შედეგად;
გ) ამინომჟავის ტრიპტაფანის დაშლას ფერმენტ ტრიპტაფანაზას მოქმედებით თან ახლავს ინდოლის წარმოქმნას. ეს უკანასკნელი გამოვლენილია ოქსილის მჟავით დასველებული ქაღალდის ნაჭრის გამოყენებით და დამაგრებული საცობის ქვეშ მკვებავი გარემოს ზემოთ. დადებით შემთხვევებში ქაღალდის ნაჭერი წითლდება;
დ) გოგირდის შემცველი ამინომჟავების (ცისტინი, ცისტეინი) დაშლის ფერმენტების იდენტიფიცირებისთვის ტარდება ტესტები H2S-ზე, როგორც დესულფურაზებით ამ ამინომჟავების დაშლის პროდუქტს. H2S-ის არსებობა ასევე გამოვლენილია ოლკენიცკის გარემოში;
ე) ურეაზას იდენტიფიცირებისთვის ფერმენტს, რომელიც არღვევს შარდოვანას, შარდოვანას და ინდიკატორს ემატება მკვებავი გარემო ნეიტრალურ pH-ზე. დადებით შემთხვევებში, საშუალო იცვლის ფერს pH-ის ტუტე მხარეზე გადასვლის გამო ამიაკის წარმოქმნის გამო. ლიპაზები- ფერმენტები ლიპიდების და ლიპოიდების დაშლისათვის. ყველაზე ხშირად, ლეციტინაზა განისაზღვრება yolk agar-ზე დაფარვით. ლეციტინაზა არღვევს ლეციტინს ფოსფოქოლინად და დიგლიცერიდად. ამ შემთხვევებში, როდესაც კოლონიები იზრდება, მათ გარშემო ჩნდება ოპალესცენტური ზონები, რომლებიც ასახავს ლეციტინაზას აქტივობას.
ტოქსინის ფერმენტები ჰემოლიზინები არის ფერმენტები, რომლებიც ანადგურებენ ერითროციტების ფოსფოლიპიდურ მემბრანას. მათი აღმოჩენა ხდება სისხლის აგარზე (5-10%) კულტურის ინოკულაციის გზით. არსებობს b-ჰემოლიზი ან სრული ჰემოლიზი, როდესაც კოლონიების ირგვლივ იქმნება გამწმენდი ზონები, ა-ჰემოლიზი, არასრული ჰემოლიზი, როდესაც კოლონიების ირგვლივ მწვანე ზონებია. ჰემოლიზის არარსებობას d-ჰემოლიზს უწოდებენ.
ციტოტოქსინები- ფერმენტები, რომლებსაც აქვთ ტოქსიკური ეფექტი სამიზნე უჯრედებზე. მაგალითად, ანაერობული მიკროორგანიზმების ტოქსინის ციტოტოქსიკურობა განისაზღვრება უჯრედულ კულტურაში. ამ მიზნით, 1 გ მასალა (განავალი ან სხვა) განზავებულია ფოსფატის ბუფერში 1:10 მასა/მოცულობით, ცენტრიფუგირდება 30 წუთის განმავლობაში 4000 rpm-ზე. სუპერნატანი იფილტრება 2O ნმ ფილტრზე, ემატება მაკკოის უჯრედული კულტურის მონოფენას და ინკუბირებულია 37°C-ზე 24-48 საათის განმავლობაში ტოქსიკური ეფექტის მიღწევამდე.
ტოქსინის გამომუშავების იმუნოქიმიური განსაზღვრა: როგორც წესი, გამოიყენება ფერმენტთან დაკავშირებული იმუნოსორბენტული მეთოდი მრავალი ეგზოტოქსინის დასადგენად - დიფტერია, ქოლერა, სტაფილოკოკური და ა.შ. ამ მიზნით გამოიყენება ტესტის სისტემები კონკრეტული ეგზოტოქსინის მონოკლონური ანტისხეულების საფუძველზე.
პასმოკოაგულაზა- ფერმენტი, რომელიც ახდენს ცხოველთა სისხლის პლაზმის კოაგულაციას. განისაზღვრება სინჯარის რეაქციაში. კურდღლის ან ადამიანის ციტრატის პლაზმის 1 მლ-ში (მთლიანი ან განზავებული 2 და 4-ჯერ ფიზიოლოგიური ხსნარით) ურევენ მიკრობის ყოველდღიური აგარის კულტურის მარყუჟს. ნარევი ინკუბირებულია თერმოსტატში 37°C ტემპერატურაზე. პოზიტიურ შემთხვევებში 2-4 საათის შემდეგ პლაზმური კოაგულაცია ხდება (თრომბი ჩნდება). ლეციტინაზა - იხილეთ ზემოთ.
ოქსიდის რედუქტაზები:
1. განმარტება ოქსიდაზები. საცდელი კულტურის ზოლები გამოიყენება მარყუჟის სახით ფილტრის ქაღალდზე, რომელიც დასველებულია ტეტრამეთილპარაფენილენდიამინის 1%-იანი ხსნარით. დადებით შემთხვევაში ჩნდება ზოლების იისფერი შეღებვა (1 წუთში).
2. კატალაზას განსაზღვრა. 3% წყალბადის ზეჟანგის ხსნარის წვეთი გამოიყენება შუშის სლაიდზე და იქ შემოდის ტესტის კულტურის მარყუჟი. კატალაზას თანდასწრებით წარმოიქმნება ჟანგბადის ბუშტები.
3. დეჰიდრაზების განსაზღვრა. დეჰიდრაზების არსებობას მსჯელობენ მიკრობის შემცირების უნარით, ე.ი. ზოგიერთი ორგანული საღებავის შემცირების უნარი (მაგალითად, მეთილენის ლურჯის 1% წყალხსნარი). საღებავი (წყალბადის მიმღები) ემატება შაქრის აგარის სვეტს (წყალბადის დონორი) და მიკრობული კულტურა ინექციით ინოკულირებულია. პოზიტიურ შემთხვევებში ასეთ გარემოზე მზარდი მიკრობი მას უფერულდება.
4. მოკლე ჯაჭვის ცხიმოვანი მჟავების სპექტრის განსაზღვრა (SCFA),ანაერობული მიკროორგანიზმები აწარმოებენ შუალედურ პროდუქტებს, მათ შორის მოკლე ჯაჭვის ცხიმოვან მჟავებს და სპირტებს, რომელთა სპექტრი (პროფილი) განსხვავებულია სხვადასხვა ტიპის მიკროორგანიზმებში და საშუალებას იძლევა მიკროორგანიზმების იდენტიფიცირება გვარის დონეზე. ყველაზე ხშირად გამოცდილია ძმარმჟავა, პროპიონის, ბუტილის, იზობუტილის, ვალერინის, იზოვალერიული, კაპრონის და იზოკაპრონის მჟავები. SCFA-ების დასადგენად გამოიყენება გაზ-თხევადი ქრომატოგრაფიის მეთოდი. იდენტიფიცირებულია ისეთი მიკროორგანიზმები, როგორიცაა აქტინომიცეტები, პროლიონიბაქტერიები, ევბაქტერიები, ბიფიდობაქტერიები და კლოსტრიდიები.
ბოლო წლების განმავლობაში, ბაქტერიოლოგიურმა ლაბორატორიებმა გამოიყენეს კომერციული ტესტის სისტემები სწრაფი ბიოქიმიური იდენტიფიკაციისთვის (მიკროორგანიზმების სხვადასხვა ჯგუფის ბიოქიმიური აქტივობის განსაზღვრა): მაგალითად, 2O ტესტები ენტერობაქტერიებისთვის და ZO ტესტები ანაერობებისთვის. იდენტიფიკაციის სქემა მოიცავს შემდეგ ნაბიჯებს:
კოლონიები ---- მომზადება ---- განაცხადი ----- ინკუბაცია ---- აღრიცხვა (+ -) ---- ინტერ-
suspensions suspensions 4 საათი 37°C პრეზენტაცია ოთხშაბათს
საიდენტიფიკაციო მასალად გამოიყენება კარგად იზოლირებული კოლონია თეფშზე ან სუფთა კულტურა სინჯარაში, საიდანაც მზადდება სუსპენზია ოპტიკური სიმკვრივის სტანდარტის N4 კონცენტრაციით, შემდეგ 55 მკლ სუსპენზია ემატება ჭაბურღილებს. ამ ტესტის სისტემის მედიით. ფირფიტა ზოლებით ინკუბირებულია 37°C ტემპერატურაზე 4 საათის განმავლობაში. აღრიცხვა შეიძლება განხორციელდეს ავტომატურად (ATV მოწყობილობის გამოყენებით) ან ვიზუალურად.ბიოქიმიური რეაქციის შედეგი ფასდება "+" ან "-" სახით და შეიტანება საცნობარო ცხრილი, რომელშიც დადებითი შედეგი შეესაბამება რიცხვით გამოსახულებას. , რის შედეგადაც მიიღება გარკვეული ციფრული პროფილი, რომელიც შეესაბამება სპეციალურად შემუშავებული ანალიტიკური პროფილის ინდექსს, რომელიც საშუალებას გაძლევთ სწრაფად ამოიცნოთ ერთი ან მეორე
მიკროორგანიზმი.
77288 0
ბაქტერიების კულტურული თვისებები
კულტურული (ან მაკრომორფოლოგიური) თვისებები მოიცავს მიკროორგანიზმების ზრდის დამახასიათებელ მახასიათებლებს მყარ და თხევად საკვებ ნივთიერებებზე. მკვრივი მკვებავი მედიის ზედაპირზე, დათესვის მიხედვით, მიკროორგანიზმები შეიძლება გაიზარდოს კოლონიების, ზოლების ან უწყვეტი გაზონის სახით.კოლონია არის იმავე ტიპის უჯრედების იზოლირებული კოლექცია, რომელიც გაიზარდა ერთი უჯრედიდან (უჯრედების კლონი). იმისდა მიხედვით, თუ სად იზრდება მიკროორგანიზმი (მკვრივი საკვები გარემოს ზედაპირზე ან მის სისქეში), განასხვავებენ ზედაპირულ, ღრმა და ქვედა კოლონიებს.
ნიადაგის ზედაპირზე მოყვანილი კოლონიები მრავალფეროვანია: ისინი სპეციფიკურია სახეობებისთვის და მათი შესწავლა გამოიყენება შესასწავლი კულტურის სახეობების დასადგენად.
კოლონიების აღწერისას მხედველობაში მიიღება შემდეგი მახასიათებლები:
1) კოლონიის ფორმა - მრგვალი, ამებოიდური, რიზოიდური, არარეგულარული და ა.შ.;
2) კოლონიის ზომა (დიამეტრი) - ძალიან მცირე (წვეტიანი) (0,1-0,5 მმ), პატარა (0,5-3 მმ), საშუალო ზომის (3-5 მმ) და დიდი (დიამეტრის 5 მმ-ზე მეტი);
3) კოლონიის ზედაპირი გლუვი, უხეში, დაკეცილი, ნაოჭიანი, კონცენტრული წრეებით ან რადიალურად განივზოლიანი;
4) კოლონიის პროფილი - ბრტყელი, ამოზნექილი, კონუსისებური, კრატერის ფორმის და სხვ.;
5) გამჭვირვალობა - მოსაწყენი, მქრქალი, მბზინავი, გამჭვირვალე, პუდრისებრი;
6) კოლონიის ფერი (პიგმენტი) - უფერო ან პიგმენტური (თეთრი, ყვითელი, ოქროსფერი, წითელი, შავი), განსაკუთრებით აღნიშნეთ პიგმენტის გამოშვება საშუალოში მისი შეღებვით;
7) კოლონიის კიდე - გლუვი, ტალღოვანი, დაკბილული, ფრთიანი და სხვ.;
8) კოლონიური სტრუქტურა - ერთგვაროვანი, წვრილმარცვლოვანი, ზოლიანი; კოლონიის კიდე და სტრუქტურა განისაზღვრება გამადიდებელი შუშის გამოყენებით ან მიკროსკოპის დაბალი გადიდებით, მიკროსკოპის მაგიდაზე დაბლა სახურავით დადებული პეტრის ჭურჭლის ინოკულაციასთან ერთად;
9) კოლონიის თანმიმდევრულობა; განისაზღვრება ზედაპირის მარყუჟით შეხებით: კოლონია შეიძლება იყოს მკვრივი, რბილი, აგარის სახით გადაზრდილი, ლორწოვანი (გაჭიმულია მარყუჟის უკან), მყიფე (ადვილად იშლება მარყუჟთან შეხებისას).
ღრმა კოლონიები ყველაზე ხშირად ჰგავს მეტ-ნაკლებად გაბრტყელ ოსპს (ოვალური ფორმის წვეტიანი ბოლოებით), ზოგჯერ ბამბის ბამბის სიმსივნეები ძაფის მსგავსი გამონაზარდებით მკვებავ გარემოში. ღრმა კოლონიების წარმოქმნას ხშირად თან ახლავს მკვრივი საშუალების გახეთქვა, თუ მიკროორგანიზმები გამოყოფენ გაზს.
ქვედა კოლონიები, როგორც წესი, ჰგავს თხელი გამჭვირვალე ფილმებს, რომლებიც ვრცელდება ფსკერზე.
კოლონიის მახასიათებლები შეიძლება შეიცვალოს ასაკთან ერთად, ისინი დამოკიდებულია გარემოს შემადგენლობაზე და გაშენების ტემპერატურაზე.
მიკროორგანიზმების ზრდა თხევად მკვებავ გარემოზე მხედველობაში მიიღება სტაციონარულ პირობებში მოყვანილი ოთხ-შვიდდღიანი კულტურების გამოყენებით.
თხევად მკვებავ გარემოში, მიკროორგანიზმების ზრდასთან ერთად, შეინიშნება გარემოს სიმღვრივე და ფირის ან ნალექის წარმოქმნა.
ნახევრად თხევად (0,5-0,7% აგარი) მკვებავ გარემოზე გაზრდისას მოძრავი მიკრობები იწვევენ გამოხატულ სიმღვრივეს, უმოძრაო ფორმები იზრდება მხოლოდ თესვის დროს გარემოში შეყვანის გზით.
ხშირად მიკრობების ზრდას თან ახლავს სუნის გამოჩენა, გარემოს პიგმენტაცია და გაზის გამოყოფა. ზოგიერთი ტიპის ბაქტერიების კულტურების დამახასიათებელი სუნი დაკავშირებულია სხვადასხვა ეთერების (ეთილის აცეტატი, ამილაცეტატი და სხვ.), ინდოლის, მერკაპტანის, წყალბადის სულფიდის, სკატოლის, ამიაკის, ბუტირის მჟავის წარმოქმნასთან.
პიგმენტების ფორმირების უნარი თანდაყოლილია მრავალი სახის მიკროორგანიზმებში. პიგმენტების ქიმიური ბუნება მრავალფეროვანია: კაროტინოიდები, ანთოციანინები, მელანინი. თუ პიგმენტი წყალში უხსნადია, მხოლოდ კულტურული დაფა იღებება; თუ ის ხსნადია, მკვებავი გარემოც ფერადდება. ითვლება, რომ პიგმენტები იცავს ბაქტერიებს მზის მავნე ზემოქმედებისგან, რის გამოც ჰაერში ამდენი პიგმენტური ბაქტერიაა, გარდა ამისა, პიგმენტები მონაწილეობენ ამ მიკროორგანიზმების მეტაბოლიზმში.
ბუნებაში არსებობს ეგრეთ წოდებული ფოსფორესცენტური ბაქტერიები, რომელთა კულტურები სიბნელეში ანათებენ მომწვანო-მოლურჯო ან მოყვითალო შუქით. ასეთი ბაქტერიები ძირითადად მდინარის ან ზღვის წყალში გვხვდება. მანათობელი ბაქტერიები - ფოტობაქტერიები - მოიცავს აერობულ ბაქტერიებს (ვიბრიოები, კოკები, წნელები).
მიკროორგანიზმების სუფთა კულტურების იზოლაცია
სუფთა კულტურა არის კულტურა, რომელიც შეიცავს იმავე სახეობის მიკროორგანიზმებს. ბაქტერიების სუფთა კულტურების იზოლაცია არის ბაქტერიოლოგიური კვლევის სავალდებულო ეტაპი ლაბორატორიულ პრაქტიკაში, სხვადასხვა გარემოს ობიექტების მიკრობული დაბინძურების შესწავლაში და ზოგადად მიკროორგანიზმებთან მუშაობისას.შესასწავლი მასალა (წყალი, ნიადაგი, ჰაერი, საკვები ან სხვა საგნები) ჩვეულებრივ შეიცავს მიკრობების ასოციაციებს.
სუფთა კულტურის იზოლაცია შესაძლებელს ხდის მორფოლოგიური, კულტურული, ბიოქიმიური, ანტიგენური და სხვა მახასიათებლების შესწავლას, რომელთა მთლიანობა განსაზღვრავს პათოგენის სახეობასა და ტიპს, ანუ ხდება მისი იდენტიფიცირება.
მიკროორგანიზმების სუფთა კულტურების იზოლირებისთვის გამოიყენება მეთოდები, რომლებიც შეიძლება დაიყოს რამდენიმე ჯგუფად:
1. პასტერის მეთოდი - საცდელი მასალის თანმიმდევრული განზავება თხევად საკვებ გარემოში ერთი უჯრედის კონცენტრაციამდე მოცულობაში (აქვს ისტორიული მნიშვნელობა).
2. კოხის მეთოდი („ფირფიტის გაყვანილობა“) - საცდელი მასალის თანმიმდევრული განზავება გამდნარ აგარში (ტემპერატურა 48-50 C), შემდგომში ჩასხმა პეტრის ჭურჭელში, სადაც აგარი მყარდება. ინოკულაციები, როგორც წესი, კეთდება ბოლო სამი-ოთხი განზავებიდან, სადაც ბაქტერიები მცირდება და მოგვიანებით, პეტრის ჭურჭელზე გაზრდისას ჩნდება იზოლირებული კოლონიები, რომლებიც წარმოიქმნება ერთი საწყისი დედა უჯრედიდან. აგარის სიღრმეში იზოლირებული კოლონიებიდან, ბაქტერიების სუფთა კულტურა მიიღება სუბკულტურით სუფთა გარემოზე.
3. შუკევიჩის მეთოდი - გამოიყენება პროტეუსის და სხვა მიკროორგანიზმების სუფთა კულტურის მისაღებად „მცოცავი“ ზრდით. სატესტო მასალა ინოკულირებულია კონდენსაციის წყალში აგარის დახრილობის ძირში. მობილურ მიკრობებს (პროტეუსს) შეუძლიათ აწიონ დახრილი აგარი, უმოძრაო ფორმები რჩება ძირში, თესვის ადგილზე. კულტურის ზედა კიდეების ხელახალი დათესვით, შეგიძლიათ მიიღოთ სუფთა კულტურა.
4. დრიგალსკის მეთოდი - ფართოდ გამოიყენება ბაქტერიოლოგიურ პრაქტიკაში, რომლის დროსაც შესასწავლი მასალა გაზავდება სინჯარაში სტერილური ფიზიოლოგიური ხსნარით ან ბულიონით. მასალის ერთი წვეთი ემატება პირველ ფინჯანს და სტერილური შუშის სპატულით ავრცელებს საშუალების ზედაპირზე. შემდეგ იგივე სპატულით (საწვავის ცეცხლში დაწვის გარეშე) იგივე თესვა ხდება მეორე და მესამე ჭიქებში.
ბაქტერიების ყოველი ინოკულაციისას სულ უფრო ნაკლები რჩება სპატულაზე და მესამე ჭიქაზე დათესვისას ბაქტერიები ერთმანეთისგან განცალკევებულად გადანაწილდება მკვებავი გარემოს ზედაპირზე. კერძების თერმოსტატში შენახვის შემდეგ 1-7 დღის შემდეგ (მიკროორგანიზმების ზრდის ტემპიდან გამომდინარე), მესამე ჭურჭელზე თითოეული ბაქტერია წარმოქმნის უჯრედების კლონს, ქმნის იზოლირებულ კოლონიას, რომელიც სუბკულტივირებულია დახრილ აგარზე დაგროვების მიზნით. სუფთა კულტურა.
5. ვაინბერგის მეთოდი. განსაკუთრებული სირთულეები წარმოიქმნება სავალდებულო ანაერობების სუფთა კულტურების იზოლირებისას. თუ მოლეკულურ ჟანგბადთან კონტაქტი მაშინვე არ იწვევს უჯრედის სიკვდილს, მაშინ დათესვა ხდება დრიგალსკის მეთოდით, მაგრამ ამის შემდეგ კერძები დაუყოვნებლივ მოთავსებულია ანაეროსტატში. თუმცა, გამრავლების მეთოდი უფრო ხშირად გამოიყენება. მისი არსი მდგომარეობს იმაში, რომ შესასწავლი მასალის განზავება ხდება გამდნარ და გაცივებულ 45-50 oC აგარის მკვებავ გარემოში.
კეთდება 6-10 თანმიმდევრული განზავება, შემდეგ საცდელ მილაკებში გარემო სწრაფად გაცივდება და ზედაპირი იფარება პარაფინისა და ნავთობის ჟელეს ნარევის ფენით, რათა ჰაერი არ შეაღწიოს მკვებავი საშუალების სისქეში. ზოგჯერ მკვებავი გარემო, თესვისა და შერევის შემდეგ გადააქვთ სტერილურ ბურის მილებში ან კაპილარულ პასტერის პიპეტებში, რომელთა ბოლოები დალუქულია. წარმატებული განზავების შემთხვევაში, ანაერობების იზოლირებული კოლონიები იზრდება საცდელ მილებში, ბურის მილებში და პასტერის პიპეტებში. იმის უზრუნველსაყოფად, რომ იზოლირებული კოლონიები აშკარად ჩანს, გამოიყენება გამჭვირვალე საკვები ნივთიერებები.
ანაერობების იზოლირებული კოლონიების მოსაპოვებლად მილს ოდნავ აცხელებენ ცეცხლზე მობრუნებით, ხოლო კედლების მიმდებარე აგარი დნება და მილის შიგთავსი აგარის სვეტის სახით სრიალებს სტერილურ პეტრის ჭურჭელში. აგარის სვეტი იჭრება სტერილური პინცეტით და კოლონიები ამოღებულია მარყუჟით. მოპოვებული კოლონიები მოთავსებულია თხევად გარემოში, რომელიც ხელსაყრელია იზოლირებული მიკროორგანიზმების განვითარებისთვის. აგარის გარემო გამოიდევნება ბურის მილიდან გაზის გავლის გზით ბამბის საცობში.
6. ჰუნგატის მეთოდი. როდესაც მათ სურთ მიიღონ ჟანგბადის მიმართ განსაკუთრებით მაღალი მგრძნობელობის მქონე ბაქტერიების იზოლირებული კოლონიები (მკაცრი აერობები), გამოიყენება ჰუნგატის მბრუნავი მილის მეთოდი. ამისთვის გამდნარი აგარის გარემოს ბაქტერიებით ნერგავენ მუდმივი დენით ჟანგბადის მინარევებისაგან განთავისუფლებული ინერტული აირის საცდელი მილის მეშვეობით. შემდეგ მილი ილუქება რეზინის საცობით და ჰორიზონტალურად მოთავსებულია სამაგრში, რომელიც აბრუნებს მილს; საშუალო თანაბრად ნაწილდება საცდელი მილის კედლებზე და მყარდება თხელ ფენად. გაზის ნარევით სავსე სინჯარაში თხელი ფენის გამოყენება საშუალებას იძლევა მიიღოთ იზოლირებული კოლონიები, რომლებიც აშკარად ჩანს შეუიარაღებელი თვალით.
7. ცალკეული უჯრედების იზოლაცია მიკრომანიპულატორის გამოყენებით. მიკრომანიპულატორი არის მოწყობილობა, რომელიც საშუალებას გაძლევთ ამოიღოთ ერთი უჯრედი სუსპენზიიდან სპეციალური მიკროპიპეტის ან მიკროლუპის გამოყენებით. ეს ოპერაცია კონტროლდება მიკროსკოპით. მიკროსკოპის სცენაზე დამონტაჟებულია ტენიანი კამერა, რომელშიც მოთავსებულია ჩამოკიდებული წვეთოვანი პრეპარატი. მოქმედი სადგამების დამჭერებში ფიქსირდება მიკროპიპეტები (მიკროპოპები), რომელთა მოძრაობა მიკროსკოპის ხედვის ველში მიკრონის სიზუსტით ხორციელდება ხრახნებისა და ბერკეტების სისტემის წყალობით. მკვლევარი მიკროსკოპის საშუალებით აშორებს ცალკეულ უჯრედებს მიკროპიპეტებით და გადააქვს მათ მილებში, რომლებიც შეიცავს სტერილური თხევადი საშუალების უჯრედის კლონის მისაღებად.
ლ.ვ. ტიმოშენკო, მ.ვ. ჩუბიკი
თუ მცენარეებზე გარკვეული სიმპტომებისა და მიკროსკოპული გამოკვლევის შედეგებიდან გამომდინარე, არსებობს ეჭვი, რომ დაავადების გამომწვევი აგენტი არის ბაქტერია, შემდეგი ნაბიჯი უნდა იყოს მისი იზოლირება.
ამ შემთხვევაში, ვარაუდობენ, რომ პათოგენი დაბინძურებულია თანმხლები ორგანიზმებით, ანუ არის შერეული პოპულაცია. პათოგენის ცალკე მზარდი კოლონიის სახით მოსაპოვებლად, ქსოვილის მაცერატი უნდა იყოს ზოლიანი გარემოზე.
თესვა შეხებით. კალცინირებული ინოკულაციის მარყუჟის გამოყენებით აიღეთ მცირე რაოდენობით მცენარეული ქსოვილის მაცერატი, რომელიც შეიცავს ბაქტერიებს და მსუბუქი მოძრაობებით, აგარის ზედაპირის დაზიანების გარეშე, წაისვით 4-6 დარტყმა მომზადებულ მკვებავ გარემოზე. მარყუჟის ხელახალი კალცინაციის შემდეგ, ფინჯანი საშუალთან ერთად ტრიალდება 90°-ით მარჯვნივ და შემდეგ მეორე დარტყმიდან კეთდება კიდევ 4-6 დარტყმა, ნემსი კვლავ კალცინდება და ტარდება მესამე თესვა. ეს მიიღწევა საწყისი მასალის განზავებას ისე, რომ ბაქტერიები თერმოსტატში 48-72 საათის განმავლობაში 28 °C-ზე ინკუბაციის შემდეგ ქმნიან სხვადასხვა ფორმისა და ფერის ცალკეულ კოლონიებს. შემდეგ კოლონიები გადააქვთ აგარის დახრილ მილაკებში შემდგომი გამოკვლევისთვის. კალცინირებული მარყუჟის გამოყენებით აიღეთ კოლონია და ფრთხილად წაისვით მკვებავ აგარზე გველის ან ზიგზაგის სახით.
კოხის ჩამოსხმის მეთოდი. კოხის ფირფიტის მეთოდი უზრუნველყოფს თითოეული კოლონიის ჩამოყალიბებას ერთი ბაქტერიული უჯრედისგან. უმჯობესია საწყისი მასალისგან სუსპენზია მოამზადოთ სტერილურ წყალში და გამოიყენოთ კოხის მეთოდი მხოლოდ ამ განზავებით. სუსპენზიის მცირე რაოდენობა გადადის პირველ სინჯარაში 60 °C-მდე გაცივებული საკვები გარემოთი. შემდეგ მილის შიგთავსს ურევენ ინოკულუმს ხელისგულებს შორის მობრუნებით. შემდეგ, აიღეთ მეორე საცდელი მილი, ფრთხილად გახსენით იგი სანთურის ცეცხლზე და გამოიყენეთ დიდი მარყუჟები, რომ გადაიტანოთ მასში სუბსტრატის სამი ნაწილი პირველი ტესტის მილიდან. კისრისა და საცობის გასროლის შემდეგ სინჯარის შიგთავსი ასხამენ პირველ პეტრის ჭურჭელში, იხსნება ჭურჭლის თავსახური იმდენი, რომ საცდელი მილის კისერი ჩასვათ მის ქვეშ. ჩამოსხმისთანავე დახურეთ ჭიქა და ფრთხილად გაანაწილეთ მკვებავი საშუალება თანაბრად.
მეორე სინჯარის შიგთავსის კარგად შერევის შემდეგ, აიღეთ მესამე სინჯარა და სუბსტრატის ექვსი ნაწილი მეორედან მასში მარყუჟით გადაიტანეთ. სინჯარის შიგთავსს ასხამენ თასში, ხოლო სინჯარის შიგთავსს, შერევის შემდეგ, ასხამენ ჭიქაში. საშუალების შემცველი კერძები ინკუბირებულია თერმოსტატში 28°C ტემპერატურაზე, რამდენიმე დღის შემდეგ საწყის მასალაში შემავალი ბაქტერიები ქმნიან კოლონიებს.
სერიული მოშენება. თუ, მაგალითად, საჭიროა ნიადაგიდან ბაქტერიების იზოლირება, მაშინ გამოიყენება სერიული განზავება. სტერილურ მკვებავ გარემოს (15 მლ თითო ჭიქა) ასხამენ ჭიქებში, სუსპენზიის ბოლო სამი განზავებიდან 0,1 მლ აყრიან გამაგრებულ აგარს და აფენენ ზედაპირზე შუშის სპატულით.
ბაქტერიების იზოლირებისთვის 1 გ ნიადაგს აჩერებენ 9 მლ წყალში, კარგად შეანჯღრევენ, აძლევენ რამდენიმე წამის განმავლობაში დადნებას და სუსპენზიიდან ამზადებენ სერიულ განზავებას. ამ მეთოდის გამოყენებით შეიძლება განისაზღვროს მიკროორგანიზმების რაოდენობა თითოეულ ნიმუშში.
თუ შეცდომას იპოვით, გთხოვთ, მონიშნეთ ტექსტის ნაწილი და დააწკაპუნეთ Ctrl+Enter.
ტესტის ნიმუშის ზედიზედ ათჯერ განზავების სერიაში ბოლო 2 განზავებისას (განზავების ხარისხი დამოკიდებულია CFU-ის რაოდენობაზე საცდელი წამლის 1 დოზაში), ითესება 0,1 მლ მიკრობული სუსპენზია პეტრის ჭურჭელზე მკვებავი ნივთიერებით. საშუალო (2 ჭიქა თითოეული განზავებისთვის). სუსპენზია თანაბრად ნაწილდება საშუალების ზედაპირზე დრიგალსკის სპატულის ან მინის მძივების გამოყენებით, სანამ სუსპენზია მთლიანად არ შეიწოვება (მშრალი). ჭურჭელს აფარებენ და თავდაყირა ათავსებენ ინკუბაციურ ღუმელში.
კულტურები ინკუბირებულია (37 1) o C ტემპერატურაზე 24-96 საათის განმავლობაში ადექვატურ პირობებში, მიკროორგანიზმის ტიპის მიხედვით (აერობული, მიკროაეროფილური ან ანაერობული). ანაერობულ ან მიკროაეროფილ პირობებში ინკუბაციისას პეტრის ჭურჭელი ნათესებით მოთავსებულია ანაეროსტატში და იქმნება საჭირო გაზის ატმოსფერო.
ეს მეთოდი შეიძლება გამოყენებულ იქნას თითოეული სახეობის ცოცხალი ბაქტერიების რაოდენობის დასადგენად მრავალკომპონენტიან პრობიოტიკებში, იმ პირობით, რომ პრეპარატში შემავალი ბაქტერიები ქმნიან კოლონიებს, რომლებიც ვიზუალურად გამოირჩევიან ფორმისა და სხვა მახასიათებლების მიხედვით.
1.2. ღრმა ჭიქის მეთოდი
ტესტის ნიმუშის ზედიზედ ათჯერ განზავების სერიაში ბოლო 2 განზავებიდან (განზავების ხარისხი დამოკიდებულია CFU-ს რაოდენობაზე ტესტის მომზადებაში), 1.0 მლ მიკრობული სუსპენზია ემატება პეტრის ჭურჭელში 90 მმ დიამეტრის გამოყენებით. სტერილური პიპეტი 1.0 მლ მოცულობით (2 ჭიქა თითოეული განზავებისთვის). დაამატეთ 20-25 მლ გამდნარი და გაციებული 42,5 ± 2,5 o C ტემპერატურაზე აგარის მკვებავი საშუალება, დაახურეთ და სწრაფად შეურიეთ ბრუნვითი და მთარგმნელობითი მოძრაობებით, ჭიქის ფსკერის მაგიდის ზედაპირიდან აწევის და გარემოს მოხვედრის თავიდან ასაცილებლად. ჭიქის სახურავზე. აგარის გამაგრების შემდეგ პეტრის ჭურჭელი თავდაყირა დგება და ინკუბირებულია ადექვატურ პირობებში (37 1) o C ტემპერატურაზე მოცემული მიკროორგანიზმისათვის საჭირო დროის განმავლობაში.
შედეგების აღრიცხვა
ინკუბაციის ბოლოს ხდება პეტრის ჭურჭელზე მოყვანილი კოლონიების დათვლა და საცდელი ნიმუშის 1 დოზაში ცოცხალი ბაქტერიების შემცველობის გამოთვლა. დათვლისას მხედველობაში მიიღეს ფირფიტები, რომლებზეც სულ მცირე 15 კოლონია გაიზარდა.
გაანგარიშების მაგალითიცოცხალი მიკრობული უჯრედების შემცველობა ტესტის ნიმუშის 1 დოზაში:
– 10 -7, 42 და 45 კოლონიის განზავების შედეგად გაიზარდა; საშუალო არითმეტიკული არის (42+45): 2 = 43,5;
– 10 -6, 410 და 450 კოლონიის განზავების შედეგად გაიზარდა; საშუალო არითმეტიკული არის (410+450) : 2 = 430;
- ცოცხალი ბაქტერიების რაოდენობა 1 დოზაში უდრის:
(43,5 ∙ 10 7 + 430 ∙ 10 6) : 2 10 = 4325000000 = 4,3 ∙ 10 9 .
გავამრავლოთ კოლონიების რაოდენობის საშუალო არითმეტიკული განზავების ხარისხით და თუ პეტრის ჭურჭელზე დათესვა ხდება 0,1 მლ მოცულობით, გავამრავლოთ 10-ზე, რომ გადაიყვანოთ 1,0 მლ.
განზავების შეზღუდვის მეთოდი, რასაც მოჰყვება თესვა თხევადი და ნახევრად თხევადი საკვები ნივთიერებებით
ყველაზე სავარაუდო რიცხვების ტესტი მილის მეთოდი (ცოცხალი ლაქტობაცილების აციდოფილების რაოდენობის განსაზღვრა)
ტესტის ნიმუშის თანმიმდევრული ათჯერ განზავების სერიაში 10 -6, 10 -7, 10 -8, 10 -9 (განზავების ხარისხი დამოკიდებულია ტესტის ნიმუშში CFU-ის რაოდენობაზე), 1 მლ მიკრობული სუსპენზია თითოეულიდან. განზავება ინოკულირებულია 2 სინჯარაში 9 მლ სტერილური უცხიმო რძით. აღნიშნულია, თუ რომელი განზავებიდან იყო მიღებული მოსავალი. პრეპარატის 10-6-ის განზავება ნატრიუმის ქლორიდის 0,9%-იან ხსნარში შეესაბამება რძეში 10-6 განზავებას. გარემოს გასაკონტროლებლად დაუმატეთ 4 საცდელი მილი რძით. ინოკულირებული და საკონტროლო მილები ინკუბირებულია (38 1) 0 C ტემპერატურაზე 3-4 დღის განმავლობაში.
ინკუბაციის ბოლოს დგინდება საცდელი რძით საცდელი მილების რაოდენობა. კულტურული შედედებისგან ამზადებენ ნაცხს და ღებავენ გრამით. თუ ნაცხებში ჩანს დამახასიათებელი ბაქტერიები და არ არის უცხო მიკროფლორა, მაშინ ეს განზავება მხედველობაში მიიღება, როგორც ამ ტიპის მიკროორგანიზმების შემცველი. საკონტროლო მილებში რძის დუღილის შემთხვევაში და თუ ნაცხებში აღმოჩენილია უცხო მიკროფლორა, კონტროლი ტარდება საშუალების ახალ პარტიაზე.
შედეგების აღრიცხვა
ცოცხალი ინდივიდების რაოდენობის გამოთვლისას გამოიყენეთ მაკკრიდის ცხრილი (ცხრილი 1). პირველ რიგში, შედგენილია რიცხვითი მახასიათებელი. იგი შედგება 3 ნომრისგან: პირველ რიგში (მარცხნივ) ჩასვით რიცხვი, რომელიც ტოლია ადუღებული რძით ბოლო განზავებისას აღებული სინჯარების რაოდენობისა, სადაც რძე იყო გახეხილი ყველა სინჯარაში (მაგალითად, 2 სინჯარა განზავება 10 -6).
შემდეგი ორი რიცხვი მიუთითებს საცდელ მილაკების რაოდენობას ხაჭოს რძით 2 მომდევნო განზავებისას (მაგალითად, 10 -7 განზავების 1 სინჯარაში და 10 -8 განზავების 1 სინჯარაში).
შედეგის რიცხვითი მახასიათებელი იქნება 211.
მაკკრიდის ცხრილის გამოყენებით იპოვეთ მიღებული ციფრული მახასიათებლის შესაბამისი სავარაუდო რიცხვი (ჩვენს შემთხვევაში, 13), გაამრავლეთ იგი განზავებაზე, რომელიც შეესაბამება რიცხვითი მახასიათებლის პირველ ციფრს (ამ მაგალითში, 10 -6). მაშინ ცოცხალი მიკროორგანიზმების რაოდენობა 1 დოზაში არის 13 ∙ 10 6 = 1.3 ∙ 10 7.
ცხრილი 1 - მაკკრიდის ცხრილი, რომელიც გამოიყენება ცოცხალი ლაქტობაცილების აციდოფილების რაოდენობის გამოთვლისას
|
რიცხვითი მახასიათებელი |
მიკროორგანიზმების ყველაზე სავარაუდო რაოდენობა 2 პარალელურ მილში ინოკულაციისას |
როგორ მოვამზადოთ სიმინდის ფაფა წყალში ნაბიჯ-ნაბიჯ რეცეპტის მიხედვით ფოტოებით
კეფირის ნამცხვრების უგემრიელესი რეცეპტები
როგორ მოვამზადოთ უგემრიელესი კომბოსტო - საიდუმლოებები უკრაინული კომბოსტო მჟავე კომბოსტოთი
ბანქოს თამაშით ბედის თხრობა საშუალებას მოგცემთ გაიგოთ ყველაფერი, რაც იმალებოდა
ვოცნებობდი, რომ სიზმარში ავტობუსი გადატრიალდა
სიზმარში დიდი მწიფე მსხლის ნაყოფის ნახვა: მნიშვნელობა
რატომ ოცნებობთ სამზარეულოზე?